剧情发生在抗日战争初期。国军中校马烽奉命组建“025敢死队”，计划袭击日寇南京城。他从行刑队列中挑选了五名被认为合适的队员，包括苏联政府军械部长麻老五、中情局特工徐飞虎、飞贼唐人杰、强大龙和朱大山。经过周密安排，马烽率领他们闯入日寇占领的南京城，成功解救出两名援华的美国医生，并保护了他们拍摄的南京大屠杀影片。随后，他们冒险刺杀了日军南京最高指挥官熊本连太郎，夺回了国宝传国玉玺。最终，为了让三十万同胞的牺牲得到伸张，他们决定在日军高层会议上与敌人同归于尽……《敢死队2010》述说着这群英雄们的壮举。