《蜘蛛侠3》讲述了蜘蛛侠（托比•马奎尔 Tobey Maguire 饰）经历了一系列挑战之后，成为了备受尊敬的义士，与心爱的人幸福地生活在一起。然而，在光环的背后，蜘蛛侠心中藏着一段隐痛：在第一部中，他曾经放过一个小偷，导致自己最亲密的亲人被小偷杀害，这件事让帕克一直耿耿于怀。生活渐入佳境的帕克开始变得目空一切，当他再次逮到那个小偷时，毫不留情地看着他坠楼身亡，却后悔莫及，因为真正的凶手是“沙人”。在将“沙人”残忍击毙后，帕克内心的邪恶渐渐膨胀，蜘蛛侠逐渐变成了邪恶的“毒蜘蛛”！令人担忧的是，帕克未察觉到自身的变化，他将如何甩掉那股邪恶的势力呢？